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第三节 白芍配方颗粒标准汤剂研究
一、白芍标准汤剂的制备
本研究根据《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求（征求意见稿）》中“标准汤剂制备”项的指导原则，参考中药药性及入药部位的分类，并参照卫生部、国家中医药管理局《医疗机构中药煎药室管理规范》的前处理方法、煎煮次数、加水量、煎煮时间等指标和参数并进行相关工艺考察；采用低温浓缩和冷冻干燥，最大限度保留中药有效成分群，制成白芍标准汤剂的冻干粉，供质量标准实验研究。根据研究结果，确定白芍标准汤剂的制备方法如下：
取白芍饮片100g，加水煎煮两次，第一次加9倍量水，浸泡30分钟，煎煮30分钟，用325目筛网趁热过滤，滤液迅速用冷水冷却。第二次加7倍量水，煎煮25分钟，用325目筛网趁热过滤，滤液迅速冷水冷却，合并两次滤液。将合并后的滤液转移至旋转蒸发仪中浓缩，浓缩至清膏含固率约为12%，分装至10ml西林瓶中，每瓶分装体积为2ml，半加塞，分装完毕后转移至真空冷冻干燥机中冻干（真空冷冻干燥工艺参数见表10-3-1，冻干曲线见图10-3-1），取出，轧铝盖，即得。白芍标准汤剂样品制备测定数据见表10-3-2。
表10-3-1 白芍标准汤剂冷冻干燥参数设置
图10-3-1 白芍标准汤剂冻干曲线图
表10-3-2 白芍标准汤剂研究汇总表
续表
二、含量测定
（一）色谱条件
以 Agilent ZORBAX SB C 18（150mm×4.6mm，5μm）为色谱柱；以乙腈 -0.1%磷酸溶液（14：86）为流动相；流速为每分钟1.0ml；柱温为30℃；检测波为230nm；进样量为10μl。理论板数按芍药苷峰计算应不低于2 000。
（二）对照品溶液的制备
精密称定芍药苷对照品8.340mg，置100ml量瓶中，加甲醇制成每1ml含79.4μg的溶液，摇匀，即得。
（三）供试品溶液的制备
取白芍标准汤剂约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟（功率250W，频率40kHz），放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
（四）方法学验证
方法学考察合格（具体内容略）。
（五）测定结果（表10-3-3）
表10-3-3 31批白芍标准汤剂芍药苷含量及转移率结果
续表
其中有4批白芍标准汤剂的转移率分别为98.89%、109.86%、98.31%、99.19%，属于异常值，应不纳入转移率结果分析。
三、特征图谱
测定方法同“第二节”中“特征图谱”项。
（一）方法学考察
1.专属性考察
精密吸取白芍标准汤剂（BS-T-23）特征图谱项下供试品溶液、参照物溶液与空白溶剂各10μl，注入液相色谱仪，按色谱条件测定，记录色谱图（图10-3-2）。
图10-3-2 白芍标准汤剂特征图谱专属性考察
结果：白芍标准汤剂6个色谱峰不受阴性空白溶剂的干扰，其中标准汤剂中特征图谱芍药苷峰与参照物溶液的保留时间一致，本法具有良好的专属性。
2.精密度考察
取白芍标准汤剂（BS-T-23）特征图谱项下供试品溶液，按照特征图谱项下色谱条件重复进样6次，进样体积10μl。以芍药苷峰为参照峰，计算相对保留时间与相对峰面积，结果见表10-3-4、表10-3-5。
表10-3-4 白芍标准汤剂精密度考察结果（相对保留时间）
表10-3-5 白芍标准汤剂精密度考察结果（相对峰面积）
结果：各色谱峰相对保留时间RSD值在0.11%～0.17%范围内，相对峰面积的RSD值在0.16%～0.58%范围内，该特征图谱方法精密度良好。
3.稳定性考察
取白芍标准汤剂（BS-T-23）特征图谱项下供试品溶液，按照色谱条件，分别在 0、2、4、8、12、24小时进样，进样体积 10μl。以芍药苷峰为参照峰，计算相对保留时间与相对峰面积，结果见表10-3-6、表10-3-7。
表10-3-6 白芍标准汤剂稳定性考察结果（相对保留时间）
表10-3-7 白芍标准汤剂稳定性考察结果（相对峰面积）
结果：24小时内各色谱峰相对保留时间RSD值在0.07%～0.44%范围内，相对峰面积RSD值在0.34%～2.15%范围内，该供试品溶液在24小时内稳定。
4.重复性考察
取同一批白芍标准汤剂（BS-T-23）约0.1 g，精密称定，平行6份，按白芍标准汤剂特征图谱项下方法制备供试品溶液，并按色谱条件，分别进样测定。以芍药苷峰为参照峰，计算相对保留时间与相对峰面积，结果见表10-3-8、表10-3-9。
表10-3-8 白芍标准汤剂重复性考察结果（相对保留时间）
表10-3-9 白芍标准汤剂重复性考察结果（相对峰面积）
结果：在平行6个供试品溶液中白芍标准汤剂6个色谱峰中，1，2，3，4，6-五没食子酰葡萄糖相对峰面积RSD较大，其余色谱峰相对峰面积RSD在0.04%～1.91%范围内。
5.中间精密度考察
由本项目组其他分析人员在不同日期和不同色谱仪下操作，取同一批白芍标准汤剂（BS-T-23）约0.1g，精密称定，平行6份，按白芍标准汤剂特征图谱项下方法制备供试品溶液，分别进样10μl。以芍药苷峰为参照峰，计算相对保留时间与相对峰面积，结果见表10-3-10、表10-3-11。
表10-3-10 白芍标准汤剂中间精密度考察结果（相对保留时间）
表10-3-11 白芍标准汤剂中间精密度考察结果（相对峰面积）
结果：不同分析人员在不同日期和不同色谱仪下操作，1，2，3，4，6-五没食子酰葡萄糖相对峰面积RSD较大，其余色谱峰相对峰面积RSD在0.13%～7.36%范围内。
（二）测定结果
按高效液相色谱法建立特征图谱的测定方法，对31批白芍标准汤剂特征图谱测定，最终确定了白芍标准汤剂特征图谱标准：规定白芍标准汤剂供试品溶液特征图谱中应呈现6个特征峰（图10-3-3、图10-3-4），以参照物峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间和相对峰面积（表10-3-12、表10-3-13），规定了各特征峰范围（表10-3-14）。
图10-3-3 白芍标准汤剂特征图谱
图10-3-4 白芍标准汤剂特征图谱
峰1：没食子酸；峰2：儿茶素；峰3：芍药内酯苷；峰4（S）：芍药苷；
峰 5 ：1，2，3，4，6- 五没食子酰葡萄糖；峰 6 ：苯甲酰芍药苷
（供试品浓度：每1ml相当于10.95mg饮片）
表10-3-12 白芍标准汤剂特征图谱相对保留时间
续表
表10-3-13 白芍标准汤剂特征图谱相对峰面积
续表
表10-3-14 白芍标准汤剂各特征峰相对保留时间和相对峰面积规定范围
本研究对白芍标准汤剂的制备工艺进行了考察，制定了白芍标准汤剂的制备方法。根据白芍标准汤剂的出膏率及主要成分芍药苷的转移率，建立了白芍标准汤剂特征图谱，并对白芍标准汤剂特征图谱的特征峰相对峰面积设定了标准范围，为白芍配方颗粒的生产工艺提供更全面的质量控制参数。