第二节 局部毒性实验

一、目的和意义

急性眼刺激实验用于确定和评价受试物对哺乳动物眼睛是否有刺激作用/腐蚀作用及其程度。眼睛刺激性是指眼球表面接触受试样品后产生的可逆性炎性变化。一般强酸或强碱物质如pH≤2或pH≥11.5，或在皮肤实验中证实具有腐蚀或严重刺激毒性的物质不必进行眼刺激实验。

二、原理

将受试物滴入或涂抹在每只实验动物的一侧眼结膜囊内，以未作处理的另一侧眼睛作为自身对照。在停止接触后的规定的时间间隔内，观察对动物眼睛的刺激和腐蚀作用程度，并依据相关评分标准评价受试物对眼睛的刺激作用强度。

三、材料与试剂

（1）动物首选健康成年白色家兔，体重2g～3kg,3～6只。如果使用其它的哺乳动物做实验，实验者应提供选择的依据。实验前24小时，要对实验动物的两只眼睛进行常规检查（包括使用荧光素钠检查），有眼睛刺激症状、角膜缺陷或结膜损伤的动物禁止用于实验。

（2）器材动物秤、试剂瓶、量杯、研钵、研杵或玻棒、吸管（0.1、1.0、5.0、10ml），吸球。

（3）试剂液态物质可使用原液或稀释至实验设计要求的浓度；固态物质或颗粒物需先研磨成细粉，再配制成一定浓度；气溶胶产品需喷至容器中，收集其液体再使用。

四、实验步骤

（1）选择健康实验动物：实验前动物要在动物实验室环境中至少适应3天时间。称重、编号，并按要求进行常规检查。

（2）染毒：轻轻拉开实验动物一侧眼睛的下眼睑，将受试样品0.1ml（100mg）滴入（或放入）结膜囊内，使上、下眼帘被动闭合1秒，以防止受试样品丢失。未处理的另一侧眼睛作为自身对照。

滴入受试样品24小时内不冲洗眼睛，如果认为必要，在24小时时可进行冲洗。

如果受试样品有明显的刺激征象，另选3只动物进行冲洗实验。在滴入受试样品30秒后，用生理盐水冲洗5分钟，水的流量和流速都不应导致眼损伤。

（3）刺激性症状观察：在滴入受试样品后的第1,24,48,72小时，用肉眼对实验动物眼睛进行检查，如果72小时时未出现刺激反应，可终止实验。若发现累及角膜或有其它眼刺激作用，7天内不恢复者，为确定该损害的可逆性或不可逆性需延长观察时间，一般不超过21天。除了对角膜、虹膜、结膜进行观察外，其他损害效应都应记录并报告。可使用荧光素钠对所有动物的眼睛作进一步检查。在每次检查中均应按表2-8记录眼的刺激反应，并按表2-9进行眼刺激强度评价。也可使用放大镜、手持裂隙灯，并按表2-10记录。

五、实验结果评价

数据应以表格形式汇总，记录观察期内每只动物的刺激评分，直到症状消失或21天实验结束。详细描述刺激的程度和性质，严重损害的出现，以及观察到的除眼以外的任何效应。按表2-11进行统计。眼刺激评分应与观察到的反应的性质和可逆性或其他方面结合进行评价。单独的积分值不能作为受试样品的刺激性质的最后评判，应将所有观察结果及各种因素进行综合评价。

六、实验结果分析

急性眼刺激实验结果从动物外推到人的可靠性很有限。白色家兔在大多数情况下对有刺激性或腐蚀性的物质较人类敏感。若另选用其他品系动物进行实验时也得到类似结果，则会增加从动物外推到人的可靠性。